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緩沖鹽使用不當(dāng)對(duì)色譜柱的影響及解決辦法

更新時(shí)間:2018-05-22      點(diǎn)擊次數(shù):1515
  緩沖鹽使用不當(dāng)對(duì)色譜柱的影響及解決辦法
  在色譜分析過程中常常需要使用緩沖鹽來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值,緩沖鹽的不當(dāng)使用對(duì)色譜柱可能造成柱壓升高、柱效下降以及使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化等影響。
  1.柱壓升高原因:緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出,堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,阻礙流動(dòng)相傳質(zhì),引起柱壓升高;
  2.相同化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化原因:如果沒有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣,色譜柱內(nèi)含有的鹽會(huì)使化合物保留時(shí)間發(fā)生變化;
  3.柱效下降原因:a.有些緩沖鹽會(huì)滲入到鍵合相的深處,損害硅膠基體,導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失,柱床變松,柱效下降;b.凝結(jié)在鍵合相表面,使C18碳鏈難以舒展,對(duì)物質(zhì)的保留能力下降。因此,用過緩沖鹽后需要對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗,水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應(yīng)特別引起注意。
  流動(dòng)相中緩沖鹽的正確使用方法
  1.使用前的處理:在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱,直至基線平穩(wěn)。原則上用于沖洗的流動(dòng)相與分析所用的流動(dòng)相含水的比例相同(或者含水更多),不同的是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。理由:緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí))流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí),如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對(duì)較小,不先沖洗掉,接下來做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大,而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí),緩沖鹽將會(huì)在色譜柱上析出,沉積下來,這將可能導(dǎo)致上述對(duì)色譜柱的傷害。
  2.使用后的處理:用于分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析所用流動(dòng)相*的區(qū)別是用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min,直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)不使用,要長(zhǎng)期保存,則需再加上一步,即用純的有機(jī)溶劑沖洗一邊,直至基線平穩(wěn)。緩沖液可以提供離子平衡的反離子,并使流動(dòng)相保持一定的離子強(qiáng)度和ph值,減少拖尾。
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